結(jié)腸炎模型誘導(dǎo)方案

結(jié)腸炎模型誘導(dǎo)方案

背景簡(jiǎn)介：

腸炎是一種病因不明的多因素疾病，主要的腸炎有2種，潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。潰瘍性結(jié)腸炎主要影響大腸或結(jié)腸，而可能影響胃腸道的任何部分。為了研究潰瘍性結(jié)腸炎，葡聚糖硫酸鈉（DSS）常被用于誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的結(jié)腸炎通過(guò)調(diào)整DSS濃度或給藥周期，很容易誘發(fā)急性、慢性或復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎。我公司為科研用戶提供用于誘導(dǎo)結(jié)腸炎的右旋糖酐硫酸鈉（DSS），以及評(píng)估其特征和并發(fā)癥的工具，用于模擬人結(jié)腸炎。

操作流程：

1）急性腸炎造模：選取成年動(dòng)物正常飼養(yǎng)1-2周→2-5%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征。

2) 慢性腸炎造模：選取成年動(dòng)物正常飼養(yǎng)1-2周→2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→停止飲用DSS，改正常飲水7-14天→重復(fù)2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→重復(fù)停止飲用DSS，改正常飲水7-14天

3) 灌胃造模：每天分別于10:00, 14:00和18:00給予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予飲水。每天末次灌胃后給予足量混合配方顆粒飼料，次日8:00取走飼料。造模時(shí)間9天。

常見問(wèn)題

1. Q: 成功誘導(dǎo)結(jié)腸炎動(dòng)物模型的關(guān)鍵因素是什么？

A: DSS的分子量、DSS溶液的濃度、動(dòng)物的種類和品系以及提供給動(dòng)物的飼料種類。

2. Q: DSS造模的操作流程？

1）急性腸炎造模：選取成年動(dòng)物正常飼養(yǎng)1-2周→2-5%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征。

2) 慢性腸炎造模：選取成年動(dòng)物正常飼養(yǎng)1-2周→2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→停止飲用DSS，改正常飲水7-14天→重復(fù)2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→重復(fù)停止飲用DSS，改正常飲水7-14天

3) 灌胃造模：每天分別于10:00, 14:00和18:00給予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予飲水。每天末次灌胃后給予足量混合配方顆粒飼料，次日8:00取走飼料。造模時(shí)間9天。 參考文獻(xiàn)：葡聚糖硫酸鈉自由飲用與定量灌胃誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎模型的比較研究，胃腸病學(xué) 2009，14（1），27-30。

3. Q: 誘導(dǎo)結(jié)腸炎動(dòng)物模型時(shí)需要注意哪些條件？

1) 用無(wú)菌水配制DSS溶液，詳細(xì)的濃度請(qǐng)參考我們的應(yīng)用指南。使用前，建議使用 0.22 µm的過(guò)濾。

2) 每1-2天更換一次新配置的DSS溶液。

3) 為了清楚地觀察造模進(jìn)展, 建議每個(gè)籠子2-3只動(dòng)物，最多不超過(guò)每個(gè)籠子5只動(dòng)物。

4) 使所有動(dòng)物的生存條件一致。

4. Q: DSS引起結(jié)腸炎的原理是什么？

參考文獻(xiàn)：Gastroenterology, 2002, 123(1):256-270;J Immunol, 2004, 172(9): 5664-5675; 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志 2013, 22(12): 1221-1224; 炎性腸病，1998，124-125；J Pharmacol Toxi-colog Methods, 2004, 50(1):81-81

5. Q: 小鼠和大鼠每天的飲水量是多少？

小鼠每天的飲水量為7-10ml，大鼠11ml/100g體重/天。

6. Q: 分子量是否影響結(jié)腸炎模型的建立結(jié)果？

36,000 - 50,000Da是結(jié)腸炎模型建立的最佳DSS分子量范圍。低分子量DSS具有較弱的炎性作用，分子量越大，吸收越困難。

7. Q: 為什么不同批次的DSS使用濃度會(huì)有差異？

DSS是葡聚糖聚合物，分子量為平均分子量，每個(gè)批次之間會(huì)有分子量的差異，而分子量對(duì)腸炎造模有影響。通常DSS批間比較穩(wěn)定，但是也有少部分批間差會(huì)大一些，所以建議客戶根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求，購(gòu)買足夠的同一批次產(chǎn)品，或者換用批次之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

8. Q: 小鼠3%的DSS飲用3天后沒(méi)有出現(xiàn)明顯的體重下降？

某些動(dòng)物出現(xiàn)反應(yīng)慢，甚至在飲用DSS第5天才出現(xiàn)體重下降，屬于正常現(xiàn)象。如果7天未出現(xiàn)明顯癥狀，則重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并增加0.5-1%的DSS的飲用濃度。

9. Q: DSS造模后出現(xiàn)小腸出血正常嗎？

DSS飲用濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致小腸出血，輕度小腸出血無(wú)明顯影響，若出血過(guò)多，可降低DSS的濃度。

10. Q: DSS飲用后體重下降明顯，但是病理切片HE染色沒(méi)有炎癥現(xiàn)象

DSS的飲用達(dá)到一定閾值才能成功誘導(dǎo)腸炎，閾值如果達(dá)不到，體重可以出現(xiàn)下降，但是病理無(wú)炎癥表現(xiàn)。

11. Q: 為什么同一籠的小鼠出現(xiàn)的癥狀有差異？

動(dòng)物之間存在個(gè)體差異，不同的動(dòng)物飲水量可能不同，而且不同的動(dòng)物對(duì)DSS的耐受性也不同。

12. Q: 為什么慢性腸炎模型的第二個(gè)周期飲用相同濃度的DSS，動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀沒(méi)有第一個(gè)周期明顯？

動(dòng)物飲用DSS一段時(shí)間后會(huì)有耐受性，所以第二個(gè)周期出現(xiàn)癥狀減弱為正常現(xiàn)象。

13. Q: DSS造模與TNBS造模有什么不同？

TNBS誘導(dǎo)的腸炎與克隆恩病相似，與潰瘍性結(jié)腸炎相似度低。TNBS致炎病程更長(zhǎng)，個(gè)體差異更大。

14. Q: 是否可以高壓滅菌？

不可以，會(huì)導(dǎo)致DSS的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。

15. Q: 從DSS誘導(dǎo)小鼠的糞便樣本中提取DNA，結(jié)腸組織中提取的RNA中會(huì)有DSS殘留，會(huì)抑制下游PCR，RT-PCR實(shí)驗(yàn)，如何處理？

精胺可以去除DSS對(duì)PCR的抑制。參考文獻(xiàn)：Journal of Microbiological Methods ，2018 Jan, 144: 1-7

16. Q: DSS造模期間是否可以進(jìn)行不同時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)，觀察DSS飲用前期什么時(shí)間會(huì)造成上皮屏障破壞？

可以，一般2天造成上皮屏障破壞，可以選擇3、5、7天；進(jìn)行病理檢測(cè)。

17. Q: 小鼠與大鼠的品系？

小鼠常用品系C57背景純，誘導(dǎo)腸炎更穩(wěn)定。使用Babl/c小鼠時(shí)，要做好預(yù)實(shí)驗(yàn)；大鼠常用品系SD和Wistar

18. Q: 小鼠的體重建議？

建議按照周齡來(lái)選擇，推薦8-12周小鼠，體重約22g左右。

19. Q: DSS可以用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)嗎？

可以，參考文獻(xiàn)：YAP triggers the Wnt/β-catenin signaling pathway and promotes enterocyte self-renewal, regeneration and tumorigenesis after DSS-induced injury. cell death and disease, 2018(9):153

20. Q: DSS可以用超聲進(jìn)行溶解嗎，會(huì)破壞其分子結(jié)構(gòu)嗎？

DSS易溶解，無(wú)需超聲即可溶解。如果必須使用超聲，也是可以的。

21. Q: DSS除引起結(jié)腸損傷，還會(huì)引起肝臟，脾臟損傷嗎？

DSS除導(dǎo)致腸道損傷外，會(huì)加速非酒精性肝硬化的進(jìn)展，部分客戶偶爾發(fā)現(xiàn)對(duì)正常動(dòng)物的肝臟也會(huì)有損傷，但對(duì)脾臟的損傷未見有報(bào)道。

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